随着生命科学的发展,NGS技术也在日趋完善、普及。建库作为NGS技术的必经过程,直接影响着NGS技术的发展。超声打断(机械法)是NGS建库中最常用的DNA片段化方法,该方法过度依赖高成本的超声仪器,对DNA片段也有一定的损伤,且耗时较长,无法满足高通量建库需求。更精准、高效的建库方法的普及迫在眉睫……
酶切建库引领建库2.0时代
Enzyme Plus Library Prep Kit是艾吉泰康®新推出的一款适用于Illumina和BGI等高通量测序平台的文库构建试剂盒。采用高质量的酶学组成,摆脱了繁琐的超声过程,操作简单快捷,更可兼容目标区域捕获,是自动化建库的首选。
酶切建库优势显著
操作简便
DNA片段化、末端修复、3’端加A三步操作一步完成,大大减少操作时间,单个文库构建只需2~3 h。
图1:酶切建库实验流程
灵活可控
通过酶切时间灵活控制打断片段的大小。
图2
200ng gDNA样本投入建库,通过控制酶切时间调整打断片段大小,满足各种插入片段长度及测序读长的建库需求。
基因组DNA片段化时间选择表
片段大小 | 基因组DNA | FFPE样本 |
---|---|---|
300~500 bp | 5 min | -- |
300 bp | 10 min | 5 min |
250 bp | 15 min | 8 min |
200 bp | 20 min | 10 min |
150 bp | 25 min | 15 min |
兼容性好
兼容不同起始量样本建库
图3
不同起始量的gDNA,37℃打断20min,文库分布范围基本一致。
对于低质量FFPE样本也有较好的兼容性
图4
备注:测序平台Novaseq
200ng 低质量的FFPE样本酶切或机械打断至相似大小,Enzyme Plus酶切打断建库捕获后数据指标优于机械打断。
文库转化效率高
样本gDNA,建库投入量200ng,PCR循环数5。
与国外某酶切产品及机械打断-Fast建库相比,文库片段大小相似,文库浓度更高,即文库转化效率更高。
图5 不同建库方法的文库片段大小
图6 文库转化效
性能优越
944K 肿瘤 T074V1 & 39.5M全外T192V1 panel捕获建库,建库投入量200ng。
结果显示,艾吉泰康Enzyme Plus酶切建库的数据指标与国外某酶切建库产品及机械打断建库的数据指标相当。
图7 不同建库方法的数据表现-T074V1
图8 不同建库方法的数据表现-T192V1
备注:测序平台Novaseq
产品订购信息
产品名称 | 产品规格 | 产品货号 |
---|---|---|
Enzyme Plus Library Prep Kit | 5T/16T/96T | TLP13-05/16/96 |
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