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MultipSeq多重扩增子测序技术

MultipSeq多重扩增子测序技术

技术介绍

iGeneTech

 

CRSIPR/Cas9脱靶位点多重扩增子靶向捕获测序检测方案是应用于CRSIPR/Cas9脱靶位点检测的客户定制产品,使用多重PCR反应,同时对CRSIPR/Cas9编辑的目标位点与预测的脱靶位点进行扩增与富集,得到扩增子文库,经过测序和生信分析,定量分析出目标编辑位点与脱靶位点的碱基序列和编辑频率,检出突变频率的灵敏度为1%(图1)。

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图1 多重PCR靶向捕获测序技术进行CRSIPR/Cas9脱靶位点检测的流程图

 

 

 

特点与优势

iGeneTech

 

 

脱靶位点检测个数:1000个以下

扩增产物长度:160-260bp

检测样本类型:细胞提取的gDNA等

gDNA起始量:1-100ng,推荐40ng

文库构建周期和通量:人工构建:96个样本/6.5h/单人

检测突变灵敏度:检测突变频率的灵敏度为1%

测序平台和读长:illumina测序平台,测序读长选择PE150;

         MGI测序平台,测序读长选择PE150

试剂盒性能指标:目标位点覆盖率高于99%;

         20%平均测序深度的覆盖率(均一性)高于96%

定制试剂盒开发周期:25个工作日

 

 

 

 

应用领域

iGeneTech

 

 

截止到2021年12月,艾吉泰康与国内多家科研院所和公司合作,共计开发近10款应用于CRSIPR/Cas9脱靶位点检测的多重PCR靶向捕获测序试剂盒,检测结果均取得了客户满意的效果。部分试剂盒的数据指标如表1所示,覆盖率和均一性指标均达到行业领先水平。

表1  4款CRSIPR/Cas9脱靶位点多重扩增子靶向捕获测序试剂盒的性能指标

Panel
名称

物种

重数

gDNA起始量(ng)

平均测序深度(X)

1X 覆盖率(%)

比对率(%)

捕获率(%)

均一性(%)

C01

161

40

2507.64

99.73

96.39

80.21

97.10

C02

71

40

2137.61

100.00

79.77

89.64

100.00

C03

215

40

2229.35

99.84

96.12

52.37

98.05

C04

95

40

3756.58

100.00

84.76

43.94

96.90

备注:Cas9脱靶验证部分Panel的捕获率较低,主要原因是脱靶区域位于内含子上,易出现非特异性扩增。

 

 

 

定制服务流程

iGeneTech

 

 

请点击以下链接,开启您的CRSIPR/Cas9脱靶位点多重扩增子靶向捕获测序产品的专属定制

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